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Euromedex公司推出的EUK001 BACTH System kit是一種基于細菌雙雜交(Bacterial Adenylate Cyclase Two-Hybrid, BACTH)技術(shù)的分子生物學(xué)研究工具,廣泛應用于蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用的研究。該技術(shù)通過(guò)利用腺苷酸環(huán)化酶(Adenylate Cyclase, AC)的模塊化特性,將待研究的蛋白質(zhì)分別與AC的T25和T18片段融合表達。當兩個(gè)目標蛋白質(zhì)發(fā)生相互作用時(shí),T25和T18片段會(huì )重新組合形成有活性的AC,從而催化ATP生成cAMP,進(jìn)而激活下游報告基因的表達。這一系統具有操作簡(jiǎn)便、靈敏度高、適用范圍廣等特點(diǎn),成為研究蛋白質(zhì)相互作用的強有力工具。
BACTH系統的核心原理源于對腺苷酸環(huán)化酶的功能研究。腺苷酸環(huán)化酶在細菌中負責催化ATP生成cAMP,而cAMP是調控多種基因表達的重要第二信使。Euromedex的EUK001 kit將這一原理巧妙地應用于蛋白質(zhì)相互作用的研究中。研究人員只需將目標基因克隆到特定的載體上,轉化入大腸桿菌感受態(tài)細胞,通過(guò)觀(guān)察報告基因的表達情況即可判斷蛋白質(zhì)之間是否存在相互作用。該系統常用的報告基因包括β-半乳糖苷酶(lacZ)和抗生素抗性基因等,這些報告基因的表達可以通過(guò)顯色反應或抗性篩選來(lái)檢測。
EUK001 BACTH System kit的主要組成部分包括:T25和T18片段表達載體、陽(yáng)性對照質(zhì)粒、陰性對照質(zhì)粒、感受態(tài)細胞以及相關(guān)檢測試劑。這些組件經(jīng)過(guò)精心設計和優(yōu)化,確保了實(shí)驗的高效性和可靠性。其中,陽(yáng)性對照質(zhì)粒表達已知相互作用的蛋白質(zhì)對,如亮氨酸拉鏈蛋白,用于驗證系統的正常工作;陰性對照質(zhì)粒則表達不相互作用的蛋白質(zhì),用于排除假陽(yáng)性結果。這種嚴謹的設計使得研究人員能夠準確判斷實(shí)驗結果的有效性。
在實(shí)際應用中,BACTH系統具有多項顯著(zhù)優(yōu)勢。首先,該系統在大腸桿菌中進(jìn)行,操作簡(jiǎn)便且成本較低,適合大規模篩選。其次,由于細菌生長(cháng)快速,實(shí)驗周期相對較短,通常只需2-3天即可獲得初步結果。此外,BACTH系統對蛋白質(zhì)的大小和性質(zhì)限制較少,能夠檢測多種類(lèi)型的相互作用,包括膜蛋白間的相互作用,這是其他雙雜交系統難以實(shí)現的。最重要的是,該系統不需要特殊的儀器設備,在常規分子生物學(xué)實(shí)驗室即可開(kāi)展實(shí)驗。
Euromedex作為一家專(zhuān)業(yè)的生命科學(xué)試劑供應商,其EUK001 BACTH System kit在產(chǎn)品質(zhì)量和技術(shù)支持方面都具有保障。公司提供詳細的操作手冊和專(zhuān)業(yè)技術(shù)支持,幫助研究人員解決實(shí)驗中可能遇到的問(wèn)題。同時(shí),該試劑盒經(jīng)過(guò)嚴格的質(zhì)量控制,確保各組分的高效性和穩定性,為科研工作提供可靠的數據支持。
在蛋白質(zhì)相互作用研究領(lǐng)域,BACTH系統與其他雙雜交技術(shù)如酵母雙雜交(Y2H)系統相比具有獨特的優(yōu)勢。酵母雙雜交系統雖然應用廣泛,但對某些蛋白質(zhì)特別是毒性蛋白或需要細菌特異性修飾的蛋白存在局限性。而B(niǎo)ACTH系統在大腸桿菌中操作,能夠更好地研究原核蛋白質(zhì)的相互作用,同時(shí)也適用于許多真核蛋白質(zhì)的研究。此外,BACTH系統還可以用于研究蛋白質(zhì)與小分子化合物的相互作用,為藥物篩選提供新的技術(shù)平臺。
隨著(zhù)蛋白質(zhì)組學(xué)研究的深入,蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò )的分析變得越來(lái)越重要。Euromedex的EUK001 BACTH System kit為這一領(lǐng)域的研究提供了有力的工具。研究人員可以利用該技術(shù)系統地篩選與目標蛋白相互作用的伙伴蛋白,繪制蛋白質(zhì)相互作用圖譜,進(jìn)而揭示蛋白質(zhì)在細胞中的功能和調控機制。在藥物研發(fā)領(lǐng)域,這一技術(shù)還可用于篩選干擾特定蛋白質(zhì)相互作用的小分子化合物,為新型藥物的開(kāi)發(fā)提供線(xiàn)索。
值得注意的是,雖然BACTH系統具有諸多優(yōu)勢,但在實(shí)際應用中仍需注意一些技術(shù)細節。例如,目標蛋白與T25或T18片段的融合可能會(huì )影響蛋白的正常折疊和功能,因此需要優(yōu)化融合位點(diǎn)或嘗試不同的構建方式。此外,某些蛋白可能在大腸桿菌中表達不良或形成包涵體,這時(shí)需要調整表達條件或考慮使用其他表達系統。實(shí)驗中的陰性對照和陽(yáng)性對照也至關(guān)重要,它們可以幫助區分真實(shí)的相互作用和非特異性信號。
Euromedex公司持續優(yōu)化其BACTH系統,最新版本的EUK001 kit在載體設計和檢測靈敏度方面都有所改進(jìn)。例如,新型載體可能包含更高效的多克隆位點(diǎn),便于基因克??;報告系統也可能更加靈敏,能夠檢測到較弱的蛋白質(zhì)相互作用。這些技術(shù)進(jìn)步使得BACTH系統在蛋白質(zhì)相互作用研究中的應用更加廣泛和可靠。
在未來(lái)的發(fā)展中,BACTH技術(shù)可能會(huì )與其他高通量技術(shù)相結合,如下一代測序技術(shù),實(shí)現大規模蛋白質(zhì)相互作用組的分析。此外,將這一系統應用于合成生物學(xué)領(lǐng)域,設計基于蛋白質(zhì)相互作用的基因線(xiàn)路,也是一個(gè)很有前景的方向。Euromedex作為該領(lǐng)域的領(lǐng)先企業(yè),很可能會(huì )繼續推出更多創(chuàng )新的產(chǎn)品和解決方案,推動(dòng)蛋白質(zhì)相互作用研究的發(fā)展。
總的來(lái)說(shuō),Euromedex EUK001 BACTH System kit是一種功能強大、操作簡(jiǎn)便的蛋白質(zhì)相互作用研究工具,為分子生物學(xué)、細胞生物學(xué)、微生物學(xué)等領(lǐng)域的研究人員提供了重要的技術(shù)支持。通過(guò)該系統,科學(xué)家們能夠更深入地理解蛋白質(zhì)的功能和調控網(wǎng)絡(luò ),為基礎研究和應用研究開(kāi)辟新的途徑。隨著(zhù)技術(shù)的不斷進(jìn)步和完善,BACTH系統必將在生命科學(xué)研究中發(fā)揮更加重要的作用。
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