也許一提到CRISPR/Cas技術(shù)，人們的第一反應是，CRISPR/Cas技術(shù)是一個(gè)高效的基因編輯系統。其實(shí)，CRISPR/Cas系統是一個(gè)多面手，不僅具有高效基因操作功能，還具有分子檢測能力。CRISPR/Cas是（clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR associate）成簇規律間隔短回文重復序列及相關(guān)蛋白質(zhì)縮寫(xiě)，它是微生物的天然“免疫系統”。

CRISPR/Cas系統在引導RNA（guide RNA，gRNA）的引導下識別目標核酸（DNA/RNA）序列后，激活Cas蛋白對靶向和非靶向核酸（DNA/RNA）分子切割。CRISPR/Cas系統在靶向識別和切割過(guò)程中轉化靶標核酸分子信號為檢測儀器或肉眼可觀(guān)察的信號。

CRISPR/Cas核酸檢測系統能夠將靶向DNA分子信號高效轉化為熒光、化學(xué)、電化學(xué)等肉眼可見(jiàn)或可檢測的信號，以此實(shí)現對靶標核酸信號分子的精準檢測。在實(shí)際應用領(lǐng)域，該技術(shù)已廣泛用于多種病原體和基因特征檢測，包括寨卡、乙腦病毒、非洲豬瘟病毒、嚴重急性呼吸系統綜合征冠狀病毒2（SARS-CoV-2）、耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的核酸檢測，以及DNA甲基化分析、HPV16和18基因分型等。值得一提的是，基于CRISPR/Cas13開(kāi)發(fā)的SARS-CoV-2核酸檢測系統，無(wú)需進(jìn)行體外核酸擴增，檢測下限約為31拷貝/μl，僅需20分鐘即可完成檢測。此外，同樣基于CRISPR/Cas13構建的多通道熒光信號核酸分子檢測系統，一次能檢測169種人類(lèi)相關(guān)病毒核酸，具備高通量、檢測迅速、成本低廉等顯著(zhù)優(yōu)勢 。

隨著(zhù)對CRISPR/Cas分子檢測技術(shù)研究的逐步深入，檢測的靶標分子類(lèi)型也逐漸豐富，可實(shí)現循環(huán)腫瘤細胞、小分子化合物、蛋白質(zhì)分子、金屬離子、酶活性、抗生素、病原微生物等靶標檢測。檢測樣本類(lèi)型從單一逐步走向復雜多樣，涵蓋人的血液、體液、牛奶、食品、環(huán)境樣本等。目前應用于非核酸分子檢測的CRISPR/Cas系統主要有Cas12a和Cas13a。CRISPR/Cas12a可以有效地檢測外泌體，此過(guò)程通過(guò)適配體技術(shù)與CRISPR/Cas12a技術(shù)聯(lián)合，轉化外泌體信號為儀器可檢測信號。伴隨著(zhù)檢測系統的優(yōu)化，檢測時(shí)間從120 ~20 min逐漸縮短，可實(shí)現POCT。CRISPR/Cas檢測的靶標分子從病原微生物到小分化合物，凸顯了CRISPR/Cas可檢測非核酸靶標分子的廣泛性、樣本類(lèi)型的普遍性以及檢測操作的便捷性，非常適合海關(guān)、車(chē)站、學(xué)校等場(chǎng)所的POCT。