產(chǎn)品描述

enLwaCas13a（enhanced LwaCas13a）是一種基于野生型LwaCas13a升級改造后獲得的高活力突變體。與野生型LwaCas13a的作用機制一樣，enLwaCas13a可在crRNA引導下特異性識別并剪切靶標ssRNA。此外，enLwaCas13a也具有反式剪切活性(即旁路剪切活性)，即當enLwaCas13a蛋白與crRNA、靶標RNA結合形成三元復合物后，便會(huì )被激活針對非特異ssRNA序列的反式剪切活性，并將體系中的任意序列ssRNA序列切碎。該活性也被廣泛用于靶標核酸的快速檢測試劑盒的開(kāi)發(fā)。

產(chǎn)品組分

a. enLwaCas13a Nuclease濃度為10 μM，即10 pmol/μL；100 pmol規格的總體積為10 μL，1,000 pmol規格的總體積為100 μL；

保存條件

-80℃或-20℃儲存；干冰運輸。

活性定義

在總體積為20 μL的1 × HOLMES Buffer for Cas13a [pH 7.6]反應體系中，37℃反應條件下，1 min內剪切1 pmol ssRNA探針所需的Cas13a酶量定義為1 transU。

例：若某批次LwaCas13a酶的反式切割活性為27.0 transU/pmol，則表明1 pmol的該批次LwaCas13a酶可在1 min內，在上述指定的反應條件下，反式切割27 pmol ssRNA探針。

實(shí)驗流程

1. 反式剪切實(shí)驗

● 反式剪切體系中各組分的用量可以根據不同的實(shí)驗目的進(jìn)行調整，用量較少時(shí)可先將各組分稀釋后加入體系，enLwaCas13a Nuclease可用1×HOLMES Buffer for Cas13a稀釋?zhuān)♂尯笮枇⒓词褂茫ㄈ粢♂尯蟮腃as13酶長(cháng)期保存，請使用Cas13 Dilution Buffer，#32013），crRNA、Target RNA及ssRNA Reporter可用Nuclease-free Water稀釋?zhuān)珮O低濃度的Target RNA（例如LOD實(shí)驗）建議用0.1% Tween 20稀釋并使用低吸附的離心管、吸頭等耗材。

實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀檢測熒光信號，37℃反應，每30 sec采集一次熒光信號。

注意事項

1. Cas13a的順式剪切(cis-cleavage): Cas13a在crRNA的引導下，特異性地剪切target RNA，且對target RNA的PFS序列要求并不嚴格。

2. Cas13a的反式剪切(trans-cleavage): 當target RNA存在時(shí)，Cas13a/crRNA與target RNA形成三元復合物(Cas13a/crRNA/target RNA)，同時(shí)，Cas13a被激發(fā)反式剪切活性，將反應體系中任意序列的單鏈RNA切碎。

3. 為防止RNase污染，請保持實(shí)驗區干凈整潔，操作時(shí)需穿戴干凈的手套、口罩，實(shí)驗所用槍頭、離心管等耗材均為RNase-free。

4. Cas13a蛋白對熱敏感，容易失活，應全程冰上配置反應體系，并在使用后立即將酶置于-20℃保存。

5. 本公司提供的Cas13a蛋白及反應緩沖液不含任何除Cas13a外的任何其它核酸酶活性。

6. 本產(chǎn)品僅供科研使用。