產(chǎn)品信息

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

LysoTracker®系列探針是對活細胞中的酸性區室進(jìn)行選擇性染色的一類(lèi)熒光染料， LysoTracker探針由一種連接一個(gè)弱堿基的熒光基團組成，其中僅弱堿可部分提供質(zhì)子，以維持PH在中性值。這使LysoTracker®探針能自由無(wú)阻地滲透細胞膜，使其能夠標記活細胞。一般聚集在球形細胞器上，適用于觀(guān)察溶酶體內部生物合成及相關(guān)發(fā)病機理。該類(lèi)探針具有幾大重要的特點(diǎn)，1）選擇性標記酸性細胞器；2）納摩爾級（nM）濃度即可有效標記活細胞；3）具有多色探針提供，可根據情況對樣品進(jìn)行多標實(shí)驗。Lysotracker中性pH下僅僅發(fā)生部分質(zhì)子化，因此該探針標記細胞器的原理可能與其完全質(zhì)子化并滯留在細胞器膜上有關(guān)。探針對酸性細胞器有高選擇性，與二硝基苯 (DNP)不同， 溶酶體紅色熒光探針DND-99探針不需二抗來(lái)檢測。

warbio公司提供LysoTracker® Red DND-99為紅色熒光標記的溶酶體探針，具有577/590 nm的最大激發(fā)/發(fā)射波長(cháng)。本品以溶于無(wú)水DMSO的1 mM儲存液形式提供。

溶酶體紅色熒光探針DND-99可用于多種顏色熒光檢測。

步驟說(shuō)明

使用前，先將本品取出回溫至室溫，并對其進(jìn)行簡(jiǎn)短離心使 DMSO 溶液集中于管底。最佳工作濃度需根據不同的實(shí)驗要求、細胞類(lèi)型、細胞或組織的膜通透性等進(jìn)行優(yōu)化。

1. 工作液的配制

利用培養基或合適的緩沖液將 1mM   儲存液稀釋至工作濃度，推薦工作液濃度為 50-75nM ；

【注意】： 1 ）為了降低探針加載過(guò)度可能引起的假陽(yáng)性，建議在不影響染色效果的情況下盡量使用低濃度。 2 ）若細胞在染色后于不含染料的培養基中孵育，會(huì )觀(guān)察到熒光信號的衰減和細胞的空泡化現象。

2. 染色

2.1 對于貼壁細胞

1 ）將細胞置于培養皿中的蓋玻片上，加入合適培養基，使其爬片生長(cháng)。

2 ）待細胞生長(cháng)到合適豐度，吸除培養液，加入適量 37 ℃預熱的含探針工作液。于生長(cháng)狀態(tài)下孵育 30min ～ 2h （具體孵育時(shí)間需根據細胞類(lèi)型而定）。

3 ）利用新鮮培養基替換上述染色液并在熒光顯微鏡（含合適濾片）下觀(guān)察。若染色不夠充分，建議增加染料濃度或延長(cháng)染色時(shí)間。

2.2   對于懸浮細胞

1 ）離心，吸除上清。

2 ）利用 37 ℃預熱的探針工作液重懸細胞，于生長(cháng)狀態(tài)下孵育 30min ～ 2h （具體時(shí)間需根據細胞類(lèi)型而定）。

3 ）離心，吸除染色液，加入新鮮培養液重懸細胞。

4 ）置于熒光鏡（含合適濾片）下觀(guān)察。若染色不夠充分，建議增加染料濃度或加長(cháng)染色時(shí)間。

【注意】：對于懸浮細胞，也可將細胞貼附于經(jīng) BD Cell-Tak 處理過(guò)的蓋玻片上，然后使用類(lèi)似于貼壁細胞的方法進(jìn)行染色。注意事項

1）DMSO有毒，使用時(shí)請小心操作。

2）了您的安全和健康，請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。

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